蛋白质下拉实验（Protein Pull-Down Assay）是广泛用于研究蛋白质-蛋白质相互作用的技术，通过使用特定的标记蛋白质捕捉与其相互作用的其他蛋白质，进而分析蛋白质间的相互关系。蛋白质下拉实验主要用于验证蛋白质-蛋白质相互作用，鉴定与特定蛋白质结合的相互作用伙伴，甚至可以在一定程度上揭示其相互作用的亲和力和结合特性。与酵母双杂交、免疫共沉淀（Co-IP）等方法相比，蛋白质下拉实验在体外环境下进行，能较为直接地捕获蛋白质间的特异性相互作用。同时，因其操作简便、灵敏度高以及能够揭示直接相互作用的优势，成为研究蛋白质-蛋白质相互作用的常用方法之一。它应用于细胞信号传导、疾病机制研究、药物靶点发现等领域。随着质谱技术和高通量数据分析的发展，蛋白质下拉实验逐渐向高通量筛选和全蛋白组水平的相互作用网络分析迈进。通过结合定量质谱技术（如iTRAQ、TMT标记），科研人员可以在更大范围内识别和分析蛋白质-蛋白质相互作用，揭示更多生物学意义。同时，利用蛋白质下拉实验与其他技术（如表面等离子体共振、免疫共沉淀）相结合，可以更全面地解析蛋白质相互作用的动态过程。

一、蛋白质下拉实验的基本原理

蛋白质下拉实验的核心原理是利用一种标记的“诱饵蛋白”（Bait Protein）作为固定化配体，通过与细胞裂解液或纯化蛋白质溶液中的目标蛋白相结合，随后将结合复合物从溶液中分离并进行检测。诱饵蛋白通常与固相载体（如琼脂糖珠、磁珠等）结合，常见标记包括GST（谷胱甘肽S转移酶）、His标签、FLAG标签等。

二、实验流程

1、固定化诱饵蛋白

将含有标签的诱饵蛋白固定在固相载体上。

2、孵育与结合

将目标蛋白质（来源于细胞裂解液或纯化蛋白质样品）与固定化的诱饵蛋白孵育，使其发生结合。

3、洗涤

去除非特异性结合的蛋白质，确保仅保留特异性相互作用的蛋白质复合物。

4、洗脱与检测

使用SDS-PAGE、Western Blot或质谱分析等技术对下拉的蛋白质进行鉴定和分析。

三、蛋白质下拉实验的应用

1. 验证蛋白质-蛋白质相互作用

蛋白质下拉实验常用于验证在高通量筛选（如酵母双杂交或免疫共沉淀）中发现的潜在相互作用伙伴。通过在体外进行精确定量分析，可以判断两种蛋白质之间是否存在直接相互作用。

2. 筛选新的结合伙伴

通过使用特定的诱饵蛋白，可以从复杂的细胞裂解液或组织样本中捕获新的结合蛋白质，帮助识别未知的蛋白质-蛋白质相互作用。

3. 分析蛋白质相互作用的结合域

通过构建不同截短形式的诱饵蛋白或目标蛋白，可以确定蛋白质之间相互作用的关键结构域或氨基酸位点。

4. 研究相互作用的调控机制

蛋白质下拉实验还可以用于研究相互作用在不同生理条件（如不同pH值、离子浓度或药物处理）下的变化，揭示调控机制。

四、蛋白质下拉实验的技术要点

1、诱饵蛋白的选择

（1）确保诱饵蛋白是正确折叠的、具有生物活性的。

（2）合理选择标签类型（如GST、His、FLAG等）和结合载体。

2、非特异性结合的控制

（1）设置适当的阴性对照（如空载体或不含诱饵蛋白的载体）。

（2）优化洗涤条件，减少非特异性结合。

3、蛋白质纯化与洗涤

（1）纯化蛋白质要确保较高的纯度，避免其他蛋白质的干扰。

（2）洗涤步骤要足够严格，以排除非特异性结合，同时避免过度洗涤导致目标蛋白丢失。

百泰派克生物科技在蛋白质下拉实验领域拥有丰富的经验和技术积累，能够为客户提供全面的蛋白质相互作用研究解决方案。我们的服务包括实验设计、蛋白质纯化、诱饵蛋白固定化、下拉实验执行以及后续的Western Blot或质谱分析。无论是验证特定的蛋白质相互作用，还是进行大规模的结合蛋白筛选，百泰派克都能够提供高质量的实验数据和科学见解，帮助科研人员加速研究进程，揭示蛋白质相互作用的分子机制。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

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北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

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